免疫熒光熒光顯微鏡技術(shù)在細胞生物學(xué)領(lǐng)域的應用
免疫熒光染色技術(shù),它可能是目前應用熒光顯微鏡較多的技術(shù)
。熒光團標記抗體可作為敏感而特異的探針,來(lái)標記固定細胞和/
或通透性細胞內的抗原,并能定位特定的蛋白質(zhì)。若用不同熒光團
標記兩個(gè)或更多抗體,并用它們來(lái)染細胞的話(huà),則同時(shí)可見(jiàn)多種蛋
白質(zhì)的分布。本單元講述固定細胞與細胞染色的基本方法,以及發(fā)
現并解決潛在問(wèn)題的技巧。
隨著(zhù)選擇性標記細胞內細胞器的熒光染料的發(fā)現,熒光顯微鏡
又多了一個(gè)用途,即用來(lái)檢測活體內特定細胞分子的空間分布。用
選擇性熒光探針標記三種細胞器(內質(zhì)網(wǎng)、高爾基復合體與線(xiàn)粒體)
的方法,
另一個(gè)較好的成像系統為共聚焦顯微鏡,它能收集標本內薄聚
焦面上的光線(xiàn)而清晰成像。
共聚焦顯微鏡在細胞生物學(xué)領(lǐng)域的應用;詳述如何實(shí)現共聚焦
光切片及如何重建標本的三維圖像;也談到了不同類(lèi)型的共聚焦顯
微鏡系統(包括激光掃描、快速掃描及雙光子)及其優(yōu)缺點(diǎn),并提供
一些建議,便于該儀器的使用。
采用免疫過(guò)氧化酶法定位細胞內抗原。采用這種方法,在光學(xué)
顯微鏡及電子顯微下均能檢測蛋白質(zhì)的分布,進(jìn)而了解不同放大倍
數的細胞組織情況。本單元涉及一些關(guān)于確�?贵w進(jìn)入抗原所在的
細胞內位置、保持抗原特性以及在固定與染色過(guò)程中維持較好的細
胞形態(tài)的技巧。另外,也談到了免疫過(guò)氧化物酶染色的優(yōu)缺點(diǎn)以及
確保其成功的操作技巧。